Sanger sekoskaita
Sanger sekoskaita - tai DNR sekoskaitos metodas, leidžiantis nustatyti tikslią nukleotidų seką. Šis metodas plačiai taikomas genetinių mutacijų diagnostikai ir paveldimų ligų nustatymui.
Principas
- Metodas pagrįstas DNR sintezės nutraukimu naudojant specialius modifikuotus nukleotidus (ddNTP).
- Gauti fragmentai išskirstomi pagal dydį kapiliarinėje elektroforezėje, o seka nuskaitoma pagal fluorescencinius signalus.
Pritaikymas
- Naudojamas pavienėms genų mutacijoms, mažiems insercijoms/delecijoms nustatyti.
- Dažnai taikomas patvirtinant kitais metodais (pvz., NGS) gautus rezultatus.
Procedūra
- Paimamas kraujo mėginys (arba kitas audinys), iš kurio išskiriama DNR.
- Atliekama PGR, amplifikuojant tikslinę DNR sritį.
- Sekoskaitos reakcija su ddNTP, po to produktai analizuojami sekoskaitos aparatu.
Normalus rezultatas
- Nustatyta seka atitinka referencinę genomą - mutacijų nerasta.
Patologinis rezultatas
- Aptikta konkreti mutacija (taškinė, insercija, delecija), siejama su liga.
- Rezultatą interpretuoja genetikas, atsižvelgdamas į klinikinius duomenis.
Klinikinės situacijos
- Įtariant paveldimą genetinę ligą (pvz., cistinę fibrozę, hemochromatozę).
- Nustatant mutacijas, susijusias su vėžinių susirgimų polinkių (pvz., BRCA1/2).
- Patvirtinant arba atmetant diagnostinius įtarimus po kitų genetinių tyrimų.
Konsultuojantys gydytojai
- Genetikas
- Onkologas
- Neurologas (paveldimoms neurologinėms ligoms)
