Southern blot tyrimas
Southern blot tyrimas - tai molekulinės biologijos metodas, naudojamas specifinėms DNR sekoms aptikti. Jis leidžia nustatyti, ar mėginyje yra dominančio geno fragmentas, bei įvertinti jo dydį ir kiekį. Ši technika dažnai taikoma genetiniams susirgimams diagnozuoti, DNR žymenims tirti ir patogenų identifikacijai.
Metodo esmė
- Southern blot remiasi DNR hibridizacija - atšilusios vienagrandės DNR molekulės prisijungia prie komplementarių sekų ant membranos.
- Tyrimo metu DNR suskaidoma restrikcijos fermentais, išskirstoma pagal dydį gelio elektroforeze, perkėliama ant membranos ir apdorojama specifiniu zondų rinkiniu.
Klinikinė reikšmė
- Padeda nustatyti genų mutacijas, delecijas, insercijas ar translokacijas.
- Naudojamas paveldimų ligų (pvz., cistinės fibrozės, hemofilijos) diagnostikai ir genetiniams pirštų atspaudams.
Procedūra
- Pirmiausia iš kraujo ar audinio mėginio išskiriama DNR.
- DNR suskaidoma restrikcijos fermentais, o fragmentai atskiriami gelio elektroforeze.
- Fragmentai denatūruojami ir perkeliami (blot) ant nailono ar nitroceliuliozės membranos.
- Membrana inkubuojama su radioaktyviai arba chemiliuminescentiškai pažymėtu DNR zondu, specifiniu dominančiai sekai.
- Nesurięti zondų molekulės nuplaunamos, o prisijungę zondai vizualizuojami autoradiografijos arba chemiliuminescencijos būdu.
Interpretacija
- Teigiamas rezultatas rodo, kad mėginyje yra dominanti DNR seka - pvz., mutacija, patogeno genomas arba transgenas.
- Juostos dydis ir intensyvumas leidžia įvertinti, ar mutacija yra homozigotinė, heterozigotinė, ir nustatyti genų kopijų skaičių.
- Pavyzdžiui, sergant pjautuine anemija, Southern blot padeda atskirti normalų, heterozigotinį ir homozigotinį hemoglobino geno variantus.
Pagrindinės situacijos
- Įtariant paveldimas ligas, susijusias su genų struktūriniais pokyčiais (pvz., Duchenne‘o raumenų distrofija).
- Atliekant DNR analizę teismo medicinoje, tėvystės nustatymui arba patogenų (pvz., ŽIV, hepatito B viruso) identifikacijai.
- Genetiniams tyrimams, kai reikia patvirtinti arba paneigti specifinės DNR sekos buvimą.
Kokie gydytojai skiria?
- Genetikos specialistai (genetikas, genetinis konsultantas).
- Infektologai, onkologai, hematologai - priklausomai nuo klinikinės situacijos.
