RAD51 foci tyrimas
RAD51 foci tyrimas yra specializuotas molekulinės genetikos metodas, naudojamas įvertinti DNR dvigrandžių trūkių atstatymo mechanizmų veiklą. Tyrimas pagrįstas RAD51 baltymo kaupimosi židinių (foci) ląstelės branduolyje nustatymu po DNR pažeidimo, kas atspindi homologinės rekombinacijos procesą. Šis tyrimas ypač svarbus onkologijoje ir genetinių sindromų diagnostikoje.
Funkcija
- Įvertina homologinės rekombinacijos (HR) atstatymo kelią - pagrindinį tikslios DNR atstatymo sistemą.
- Nustato RAD51 baltymo lokalizaciją ir kaupimąsi DNR pažeidimo vietose (foci) ląstelėse po apšvitinimo ar cheminio pažeidimo.
Kilmė
- RAD51 yra evoliuciškai išsilaikęs baltymas, atsakingas už DNR homologinės rekombinacijos metu.
- Foci susidaro aktyvuojant ataksijos telangiektazijos mutuotą (ATM) ir ATR signalinius kelius.
Procedūra
- Iš paciento paimamos kraujo ląstelės (limfocitai) arba fibroblastai, kurie auginami specialioje terpėje.
- Ląstelės veikiamos jonizuojančiąja spinduliuote arba chemoterapiniu preparatu, sukeliančiu DNR dvigrandžius trūkius.
- Po inkubacijos (paprastai 1-4 val.) ląstelės fiksuojamos ir dažomos specifiniais anti-RAD51 antikūnais.
- Imunofluorescencine mikroskopija arba automatizuota vaizdo analize vertinamas foci skaičius ir intensyvumas ląstelės branduolyje.
Priežastys
- Padidėjęs RAD51 kaupimasis gali rodyti aktyvuotą DNR atstatymo atsaką - tai dažnai stebima navikinėse ląstelėse, turinčiose mutacijų BRCA1/BRCA2 genuose (sutrikus alternatyviai atstatymo keliai).
- Kai kurios chemoterapinės medžiagos (pvz., platinos preparatai) gali laikinai padidinti foci formavimąsi.
- Retais atvejais - ląstelės su RAD51 amplifikacija (genomo nestabilumas).
Priežastys
- Reikšmingai sumažėjęs foci skaičius (<3 foci/ląstelė) rodo homologinės rekombinacijos nepakankamumą, dažniausiai dėl BRCA1, BRCA2, PALB2, RAD51C/D ar kitų HR genų mutacijų.
- Tai gali būti susiję su paveldėtu vėžio sindromu (pvz., krūties ir kiaušidžių vėžiu, Fankoni anemija).
- Pacientams su HR defektu gali būti jautrumas PARP inhibitoriams.
Klinikinės indikacijos
- Įtarus paveldimą krūties ar kiaušidžių vėžio sindromą, kai genų sekoskaita yra neinformatyvi.
- Onkologijoje - siekiant nustatyti naviko jautrumą PARP inhibitoriams (pvz., sergant kiaušidžių, kasos, prostatos vėžiu).
- Esant Fankoni anemijai ar kitiems DNR atstatymo sutrikimams diagnozuoti. Tyrimą dažniausiai skiria: genetikai, onkologai, hematologai.
| Bendra | Rezultatas pateikiamas kaip vidutinis foci skaičius ląstelėje po apšvitinimo. Normalus atsakas: ≥10 foci/ląstelė (priklausomai nuo metodo). Sumažėjęs foci skaičius rodo HR defektą. |
|---|---|
| Vyrams | Standartinis atsakas: 10-30 foci/ląstelė. |
| Moterims | Standartinis atsakas: 10-30 foci/ląstelė. |
