Kometos testas
Kometos testas (angl. Comet assay) - tai jautrus ir greitas metodas, skirtas DNR pažeidimams ląstelėse nustatyti. Tyrimas dažnai naudojamas toksikologijoje, genotoksiškumo vertinime ir moksliniuose tyrimuose. Rezultatai padeda įvertinti oksidacinį stresą, radiacijos poveikį ar cheminio junginio žalą DNR.
Funkcija
- Įvertina DNR grandinių trūkius ir pažeidimus atskirose ląstelėse.
- Leidžia nustatyti tiek vienos grandinės, tiek dviejų grandinių trūkius.
- Dažnai taikomas apoptozės ir nekrozės tyrimuose.
Kilmė
- Metodas sukurtas 1984 m. Östling ir Johanson.
- Pavadinimas kilo nuo susidariusios kometos formos, kai pažeista DNR migruoja elektriniame lauke.
Mėginio paruošimas
- Ląstelės suspenduojamos agaroze ir užlašinamos ant mikroskopinio stiklelio.
- Ląstelės lizuojamos, kad būtų pašalintos ląstelių membranos ir baltymai.
Elektroforezė
- Stiklelis dedamas į šarminį arba neutralų buferį ir atliekama elektroforezė.
- Pažeista DNR migruoja link teigiamo elektrodo, sudarydama kometos uodegą.
Dažymas ir vertinimas
- DNR dažoma fluorescenciniu dažu (pvz., SYBR Green, etidžio bromidu).
- Vaizdas stebimas fluorescenciniu mikroskopu ir analizuojama uodegos ilgis bei intensyvumas.
Galimos priežastys
- Didelis oksidacinis stresas (pvz., dėl uždegimo, rūkymo).
- Jonizuojančiosios spinduliuotės poveikis.
- Cheminių mutagenų ar toksinių medžiagų kontaktas.
- Kai kurie vaistai (chemoterapija).
- DNR reparacijos sistemų sutrikimai.
Interpretacija
- Padidėjęs uodegos DNR kiekis rodo didesnį DNR pažeidimo lygį.
- Rezultatas gali būti kiekybiškai išreikštas kaip uodegos momentas arba procentinė DNR uodegoje.
- Teigiamas rezultatas nebūtinai reiškia klinikinę ligą; dažnai naudojamas rizikos įvertinimui.
Moksliniai tyrimai
- Genotoksiškumo ir mutageniškumo vertinimas.
- Aplinkos teršalų poveikio analizė.
- Radiacinės žalos nustatymas.
Medicinos sritys
- Onkologija (chemoterapijos efektyvumo stebėjimas).
- Toksikologija (apsinuodijimų diagnostika).
- Konsultuoja: genetikas, toksikologas, onkologas.
