Reversinės transkripcijos PGR

Reversinės transkripcijos polimerazės grandininė reakcija (RT-PGR) - tai jautrus molekulinės diagnostikos metodas, naudojamas RNR aptikti ir kiekybiškai įvertinti. Šis tyrimas ypač svarbus virusinėms infekcijoms (pvz., SARS-CoV-2, gripui, ŽIV) nustatyti, taip pat onkologijoje navikinių ląstelių genų ekspresijai tirti. RT-PGR sujungia atvirkštinę transkripciją (RNR pavertimą DNR) ir klasikinę PGR, leidžiančią amplifikuoti tikslinę nukleorūgštį.

Funkcija
  • Aptinka ir kiekybiškai nustato RNR sekas mėginyje
  • Leidžia diagnozuoti aktyvias virusines infekcijas (nes virusai dažnai turi RNR genomą)
  • Naudojamas genų ekspresijos tyrimuose - nustato, kokie genai aktyvūs ląstelėse
Kilmė ir principas
  • Metodas sukurtas 8-ajame dešimtmetyje, patobulinus klasikinę PGR
  • Pirmiausia atliekama atvirkštinė transkripcija: fermentas reversinė transkriptazė paverčia RNR į komplementarią DNR (cDNR)
  • Vėliau cDNR amplifikuojama standartine PGR, naudojant specifinius pradmenis ir DNR polimerazę
Procedūra
  • Dažniausiai tyrimui imamas tepinėlis iš nosiaryklės, kraujo mėginys arba biopsinė medžiaga
  • Mėginys apdorojamas tirpalu, išskiriant RNR
  • Pridedami specifiniai pradmenys, nukleotidai, reversinė transkriptazė ir DNR polimerazė
  • Atliekamas ciklinis temperatūros keitimas: denatūracija (DNR išsiskiria), hibridizacija (pradmenys prisijungia) ir elongacija (naujos grandinės sintezė)
  • Rezultatas stebimas realiuoju laiku (naudojant fluorescencinius žymenis) arba po PGR elektroforezės būdu
Ką reiškia teigiamas rezultatas?
  • Rasta konkreti RNR seka - tai patvirtina aktyvią infekciją (pvz., SARS-CoV-2, gripą, ŽIV, hepatitą C) arba specifinio geno ekspresiją navikinėse ląstelėse
  • Rezultatas gali būti pateikiamas kaip aptikta/neaptikta arba kiekybiškai (CT vertė - kuo mažesnė, tuo daugiau RNR mėginyje)
  • Teigiamas rezultatas neatsako, ar liga jau praėjusi - gali išlikti RNR fragmentai net ir po simptomų išnykimo
Interpretacijos niuansai
  • Klaidingai teigiamas rezultatas gali atsirasti dėl mėginio užteršimo arba kryžminės reakcijos su panašiomis RNR sekomis
  • Kiekybinė RT-PGR (qRT-PCR) leidžia stebėti viruso kiekio pokyčius gydymo metu
Infekcinės ligos
  • Įtariant ūmią virusinę infekciją (COVID-19, gripą, kito tipo koronavirusus)
  • Lėtinėms virusinėms infekcijoms (ŽIV, hepatitas B, C, citomegalovirusas) diagnozuoti ir stebėti
Onkologija ir genetika
  • Tiriant vėžio ląstelių genų ekspresijos profilius (pvz., krūties vėžio receptorių tyrimai)
  • Nustatant minimalią liekamąją ligą (MRD) po gydymo
Gydytojų specialybės
  • Infekcinių ligų gydytojas - užsako tyrimą įtarus virusinę infekciją
  • Onkologas - naudoja RT-PGR navikinių mutacijų ir ekspresijos nustatymui
  • Genetikas - vertina genų ekspresijos pokyčius ir nustato paveldimas ligas

Ką gali parodyti šis tyrimas?

Žemiau pateiktos ligos, kurias padeda nustatyti ar stebėti šis tyrimas. Juostelės ilgis ir procentas rodo, kuriai daliai sergančiųjų tyrimo rezultatas būna pakitęs.

Simptomai, dėl kurių dažnai skiriamas šis tyrimas
Pakilusi temperatūra Pūliai ant migdolų

Tinklapyje esanti informacija yra bendro pobūdžio ir nėra individuali medicininė konsultacija. Tyrimų atsakymus turi vertinti sveikatos priežiūros specialistas, atsižvelgdamas į kitus tyrimų duomenis bei Jūsų jaučiamus simptomus. Portalas neprisiima atsakomybės už sprendimus, priimtus pagal šią informaciją.

Diskusija

Pasidalinkite savo patirtimi apie šį tyrimą: kada jis buvo skirtas, koks buvo rezultatas, kaip sekėsi. Jūsų istorija gali padėti kitiems.

Komentarų dar nėra. Būkite pirmas!